細菌內毒素定量光度測定法操作規程與有效性評估指南

一、概述

細菌內毒素檢查法（定量檢測）之光度測定法是一種利用光譜分析技術來測定樣品中細菌內毒素含量的方法。此方法依賴于鱟試劑（一種從鱟的血液中提取的生物試劑，對細菌內毒素高度敏感）與內毒素反應產生的濁度變化，通過比色法量化內毒素水平。

二、標準曲線的制備

材料準備：用標準內毒素配成溶液，并制成至少3個不同濃度的稀釋液，稀釋度不得大于10，濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。

試驗設置：每一稀釋步驟的混勻時間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時設置2支陰性對照。

數據分析：當陰性對照在設定的時間內不發生反應時，對全部數據進行線性回歸分析。標準曲線的相關系數(r)的絕對值應大于或等于0.980，否則需重新試驗。

三、光度測定法操作步驟

溶液準備：選擇標準線中點或一個靠近中點的內毒素濃度，制備溶液A、B、C和D。

加樣與保溫：參照所用儀器和試劑的有關說明，確定供試品和鱟試劑的加樣量、比例以及保溫時間。每種溶液至少做2個平行管。

檢測與計算：使用溶液C生成的標準曲線來計算溶液A的每一平行管的內毒素濃度。通過溶液B和A的濃度差計算內毒素的回收率，確保其在50%-200%的范圍內。

四、試驗有效性判定

標準曲線可靠性：系列溶液C的結果需符合標準曲線的可靠性試驗要求。

回收率：用溶液B中的內毒素濃度減去溶液A中的內毒素濃度后，計算出的內毒素的回收率應在50%-200%的范圍內。

陰性對照：溶液D（陰性對照）在規定的反應時間內未檢測出內毒素。

供試品判定：若供試品溶液所在平行管的平均內毒素濃度乘以稀釋倍數和濃度后，小于規定的內毒素限值，則判供試品符合規定；若大于規定的內毒素限值，則判供試品不符合規定。

五、注意事項

嚴格遵守實驗室操作規范，確保試驗環境的潔凈和穩定。

使用經細菌內毒素試驗驗證合格的無熱原器具，以減少干擾和誤差。

遵循所有關于內毒素旋渦震蕩次數的建議，確保試驗的準確性和可靠性。

定期對儀器進行維護和校準，以保證其性能的穩定和準確。

這種方法是藥品、醫療器械及生物制品安全性評估中重要的一部分，確保產品無細菌內毒素污染，保障患者安全。