鱟試劑在細菌內毒素檢查法中的使用方法

一、鱟試劑在細菌內毒素檢查法中的正確使用

內毒素檢查法結果準確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關性很大^[1]，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關。所以，一定要嚴格執行鱟試劑的質量標準，規范使用鱟試劑。

（一）保證所使用鱟試劑的質量

鱟試劑的質量主要表現在其靈敏度、自凝時間與成膠狀態三個方面:靈敏度穩定；自凝時間不低于24h^[2]；具有一定的緩沖能力與合適的pH；反應后即形成堅實凝膠，將成膠安瓿翻轉180°而不會被破壞。而質量稍差的鱟試劑存放一定時間后（如半年）其靈敏度可能發生變化，而靈敏度的改變會使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發生變化^[3]。因此，需選擇具有國家頒發的批準文號，質量穩定的鱟試劑。

（二）對鱟試劑靈敏度進行監測性復核

由于不同廠家鱟試劑質量不盡相同，即便是相同廠家不同批號的鱟試劑也有差異，這便導致鱟試劑靈敏度復核值與標示值不盡一致，因此鱟試劑的復核值對檢測結果有顯著影響^[4]。每使用新批號鱟試劑時應復核其靈敏度；對留樣鱟試劑自生產之日起，每6個月進行一次靈敏度檢測，其靈敏度在有效期內應符合規定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標準規定及適當的貯存條件下，3年內其靈敏度變化不大，是穩定的。建議可適當延長其有效期^[5，6]。因此，對鱟試劑靈敏度進行監測性復核有利于確保實驗的準確性。

（三）使用過程正確操作

選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過程中尤為重要。在操作過程中要注意以下幾點:

1. 實驗室要求潔凈、無塵埃流通；檢驗人員同時注意衛生的保持。在整個使用操作過程中應防止微生物的污染，例如空氣的流動，人員的口沫、汗液污染等。

2. 鱟試劑開啟、溶解和配制時應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。

3. 鱟試劑中含有多種蛋白質，用力振搖會產生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測的準確性，所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。

4. 量取和加樣反應物時，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。

5. 生成凝膠的最適pH值為6~-8，對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液（5%，10%）等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時，尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品，應考慮供試品的pH值^[5]。

6. 使用時要嚴格控制溫度和時間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時反應已開始，并在一定的溫度范圍內，反應溫度越高，反應速率越大；保溫時間的增長，也會提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽性的發生^[7]，導致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時間。

7. 保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢，應及時將玻璃器具允分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設定的溫度后開始計時，十烤至少1h^[8]。也可用其他經確證不十擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%雙氧水浸泡4h，用無熱原水沖洗，70℃干燥備用。

【參考文獻】

[1] 梁蘋,蔡紅.鱟試劑靈敏度對細菌內毒素檢查的影響.華西藥學雜志,1999,14(3):204-204.

[2] 衛生部.部標準《鱟試劑》修訂稿. WS1-364(B-123)-91.

[3]張紅霞,陳慧,馬金剛.影響鱟試劑靈敏度測定結果因素的分析.中國藥師,2007,10(8):825-826.

[4] 程義琳,吳蕙玲.鱟試劑靈敏度對檢測結果的影響.中國藥師,2005,8(4): 344-345.

[5] 陳引秀.鱟試劑靈敏度穩定性的考察.海峽藥學,2004,16(3): 83-84.

[6] 金華.鱟試劑靈敏度穩定性觀察.醫學理論與實踐，2004，17(1):84-84.

[7]黃冬,房判石.鱟試劑法檢測細菌內毒素假陽性原因淺析.首都醫藥,2002,9(5): 53-54.

[8]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標準操作規范.北京:中國醫藥科技.